HADHA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430176

Übersicht

Mouse Hadha kodiert die Alpha‑Untereinheit des mitochondrialen trifunktionellen Proteins (HADHA), eines zentralen Enzymkomplexes der β‑Oxidation langkettiger Fettsäuren, der sowohl Enoyl‑CoA‑Hydratase‑ als auch 3‑Hydroxyacyl‑CoA‑Dehydrogenase‑Aktivitäten katalysiert. HADHA unterstützt den mitochondrialen Energiestoffwechsel, indem es den Lipidabbau mit der Bildung von Acetyl‑CoA und dem nachgeschalteten Fluss durch den Citratzyklus (TCA‑Zyklus) koppelt, mit weitreichenden Auswirkungen auf das Redoxgleichgewicht und die metabolische Anpassung. Eine Störung der HADHA‑Funktion wird mit einer beeinträchtigten mitochondrialen Nutzung von Fettsäuren in Verbindung gebracht und ist relevant für angeborene Stoffwechselstörungen, die oxidative Gewebe wie Leber, Herz und Skelettmuskel betreffen. Hadha wird daher breit in Signal- und Stoffwechselwegen untersucht, die mitochondriale Homöostase, Nährstoffstress‑Antworten und lipidvermittelte Signalgebung miteinander verknüpfen.

Das HADHA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hadha-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hadha-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hadha nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HADHA-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hadha-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HADHA-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hadha-Exone abzielen, die für die HADHA-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hadha-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HADHA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HADHA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hadha-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HADHA HDR-Plasmid (m) und HADHA HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hadha-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hadha-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.