Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO GβL (m): sc-425272
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- GβL Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique GβL, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GβL Antibody (E-9): sc-514982
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO GβL (m) | sc-425272 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Mlst8 code la protéine GβL (mLST8), un composant central des complexes mTORC1 et mTORC2, qui stabilise la kinase mTOR et soutient l’assemblage des complexes ainsi que leur signalisation en aval. Via ces complexes, GβL influe sur la détection des nutriments et des facteurs de croissance, le contrôle de la traduction, l’autophagie et la régulation du cytosquelette, en intégrant les voies amont PI3K–AKT et apparentées. Dans les systèmes murins, la perturbation de Mlst8 est utilisée pour étudier comment la signalisation mTOR coordonne la croissance cellulaire, le métabolisme et les réponses au stress selon les tissus et les contextes du développement. Une activité dérégulée de la voie mTOR est largement impliquée dans la biologie des maladies prolifératives et métaboliques, ce qui fait de Mlst8 un nœud utile pour des études mécanistiques portant sur la dépendance à la voie et la reconfiguration des réseaux de signalisation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GβL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mlst8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mlst8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mlst8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GβL.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mlst8 pour l'étude de la signalisation de GβL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Mlst8 essentiels à la fonction de GβL
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mlst8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le GβL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GβL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mlst8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le GβL plasmide HDR (m) et le GβL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mlst8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mlst8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.