G_{β 1} Lentiviral Activation Particles (h2): sc-401901-LAC-2

Das humane GNB1 kodiert die G‑Protein‑Beta‑1‑(Gβ1)-Untereinheit, eine zentrale Komponente heterotrimerer G‑Proteine, die obligate Dimere mit Gγ‑Untereinheiten bildet, um aktivierte GPCRs mit nachgeschalteten Effektoren zu koppeln. Gβ1-haltige Komplexe koordinieren die Signalweiterleitung über cAMP/PKA-, PLCβ–IP3/DAG–PKC- und Ionenkanal-regulatorische Signalwege und prägen damit die Dynamik von Second Messengern, die Membran-Erregbarkeit sowie die Desensibilisierung und Internalisierung von Rezeptoren. Genetische und funktionelle Störungen von GNB1 stehen mit veränderter Neurotransmission und entwicklungsbiologischer Signalgebung in Zusammenhang und wurden bei neuroentwicklungsbedingten Erkrankungen sowie in ausgewählten Krebsarten beschrieben, was seine Eignung für die Untersuchung der Fehlregulation von GPCR-Netzwerken unterstreicht. Die Geneditierung von GNB1 ermöglicht die mechanistische Aufklärung Gβγ-abhängiger Signalwege, die Analyse epistatischer Wechselwirkungen mit GPCR-/Effektor-Knoten und die Zuordnung von Phänotypen in neuronalen, kardialen und proliferativen Zellmodellen.

Gβ 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GNB1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Gβ 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GNB1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Gβ 1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GNB1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.