Gα z Double Nickase Plasmid (h): sc-402241-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gα z Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gα z Double-Nickase-Plasmid (h) und Gα z Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNAZ abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gα z Double Nickase Plasmid (h) | sc-402241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα z Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAZ kodiert die humane Gαz‑Untereinheit, ein Mitglied der inhibitorischen Gi/o‑Familie heterotrimerer G‑Proteine, die aktivierte GPCRs mit nachgeschalteten Effektoren koppeln. Gαz moduliert die cAMP‑Signalübertragung durch die Regulation der Adenylylcyclase und beeinflusst MAPK‑ und PI3K‑assoziierte Signalwege, die Zell‑Erregbarkeit, Sekretion und wachstumsbezogene Antworten prägen. Als pertussistoxin‑unempfindliches G‑Protein mit besonderen biochemischen Eigenschaften wird es in neuronalen und endokrinen Signalkontexten untersucht, in denen rezeptorabhängige Second‑Messenger‑Dynamiken streng kontrolliert sind. Eine fehlregulierte GPCR‑G‑Protein‑Signalgebung unter Beteiligung von GNAZ wurde in krankheitsrelevanten Modellen aberranter Proliferation und veränderter Neurotransmission untersucht, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt in der Forschung zu Signalnetzwerken unterstreicht.
Gα z Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNAZ-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNAZ abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNAZ-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNAZ-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.