Gα t2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401528
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Gα t2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Gα t2 , lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Gα t2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401528 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
GNAT2 codifica la subunidad alfa de la transducina (Gαt2), una proteína G heterotrimérica que acopla las opsinas activadas a los efectores aguas abajo en la fototransducción. Tras la estimulación de un GPCR, Gαt2 intercambia GDP por GTP, se disocia de Gβγ y modula la señalización de nucleótidos cíclicos para moldear la excitabilidad celular y las respuestas dependientes del estímulo. Aunque se ha caracterizado principalmente en contextos de señalización retiniana, GNAT2 constituye un punto de entrada accesible para estudiar el acoplamiento GPCR–proteína G, la regulación del ciclo de la GTPasa y los mecanismos de terminación de la señal que interactúan con el metabolismo de cGMP y el control de canales iónicos. Las alteraciones genéticas de GNAT2 se han relacionado con fenotipos hereditarios de disfunción visual, lo que respalda su relevancia para modelar defectos en la señalización sensorial y la compensación de vías.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Gα t2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GNAT2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GNAT2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GNAT2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Gα t2 .
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GNAT2 para la investigación de la señalización de Gα t2 , estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de GNAT2 críticos para la función de Gα t2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GNAT2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Gα t2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Gα t2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GNAT2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Gα t2 (h) y el plásmido HDR Gα t2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GNAT2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GNAT2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.