Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Gα t1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401559-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gα t1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gα t1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Gα t1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNAT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Gα t1: sc-518139
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gα t1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401559-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα t1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401559-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAT1 kodiert die stäbchenspezifische Transducin-α‑Untereinheit Gαt1, ein heterotrimeres G‑Protein, das während der Phototransduktion aktiviertes Rhodopsin mit der cGMP‑Phosphodiesterase (PDE6) koppelt. Bei Lichtstimulation tauscht Gαt1 GDP gegen GTP aus und leitet eine Signalkaskade weiter, die den cGMP‑Spiegel senkt, die Aktivität der zyklonukleotid‑gesteuerten Kanäle moduliert und so Membranpotenzial und synaptischen Output der Photorezeptoren formt. Diese GPCR‑vermittelte Kaskade wird durch GTP‑Hydrolyse und die erneute Assoziation mit den βγ‑Untereinheiten streng reguliert und integriert so Signalverstärkung und Erholungskinetik in retinalen Stäbchen. Eine Fehlregulation der GNAT1‑abhängigen Signalübertragung wurde mit erblichen retinalen Funktionsstörungen in Verbindung gebracht, was GNAT1 als Ziel für mechanistische Studien zur visuellen Signalübertragung und Photorezeptor‑Physiologie unterstützt.
Gα t1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNAT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNAT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNAT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNAT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.