G_{α o} CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400897

Übersicht

GNAO1 kodiert die menschliche heterotrimere G‑Protein‑α‑Untereinheit Gαo, eine dominante Signalkomponente der Gi/o‑Familie, die in Neuronen besonders stark vertreten ist und aktivierte GPCRs mit der Hemmung der Adenylylcyclase sowie der Modulation von Ionenkanälen koppelt. Über die Regulation der cAMP/PKA‑Signalgebung, der Aktivität von Ca2+- und K+-Kanälen sowie nachgeschalteter MAPK‑ und Neurotransmitterfreisetzungs‑Signalwege prägt Gαo die synaptische Übertragung, die neuronale Erregbarkeit und die Entwicklung neuronaler Netzwerke. Eine veränderte GNAO1‑Funktion wird mit neuroentwicklungsbedingten und Bewegungsstörungs‑Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch GNAO1 einen zentralen Knotenpunkt zur Untersuchung der GPCR‑getriebenen Signalarchitektur in zellulären und neuronalen Modellen darstellt. Die experimentelle Störung von GNAO1 unterstützt mechanistische Studien zur Spezifität der Rezeptorkopplung, zur Dynamik von Second Messengern und zu aktivitätsabhängigen transkriptionellen Antworten.

Das Gα o CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GNAO1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GNAO1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GNAO1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Gα o-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GNAO1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Gα o-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GNAO1-Exone abzielen, die für die Gα o-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GNAO1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Gα o CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Gα o CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GNAO1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Gα o HDR-Plasmid (h) und Gα o HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GNAO1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GNAO1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.