G_{α i-2} CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400568-ACT

GNAI2 kodiert die humane heterotrimere G‑Protein‑α‑Untereinheit Gαi‑2, eine GTPase, die viele GPCRs mit der Hemmung der Adenylylcyclase und einem verminderten intrazellulären cAMP-Spiegel koppelt. Über die GPCR–Gi-Signalübertragung beeinflusst Gαi‑2 die Aktivität der MAPK- und PI3K‑AKT‑Signalwege, reguliert die Funktion von Ionenkanälen und moduliert Chemotaxis, Sekretion sowie Zytoskelettdynamik in unterschiedlichen Zelltypen. Veränderte GNAI2-Signalgebung wird sowohl im Zusammenhang mit dem Trafficking von Immunzellen und entzündlichen Reaktionen als auch mit onkogenen Prozessen untersucht, bei denen GPCR‑getriebene Proliferation und Migration fehlreguliert sind. Durch seine zentrale Rolle in der Kontrolle von Second Messengern ist es ein nützlicher Knotenpunkt, um rezeptornahe Signalübertragung und kontextabhängige Umverdrahtungen von Signalwegen zu untersuchen.

Gα i-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GNAI2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gα i-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GNAI2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GNAI2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gα i-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GNAI2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gα i-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gα i-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GNAI2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.