GSTO1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404107-ACT

Human GSTO1 kodiert die Glutathion-S-Transferase Omega-1, ein atypisches Enzym der GST-Familie, das Thioltransferase- und Deglutathionylierungsreaktionen katalysiert, die für die Aufrechterhaltung des zellulären Redoxgleichgewichts wichtig sind. Durch die Regulation des S‑Glutathionylierungsstatus von Proteinthiolen trägt GSTO1 zur antioxidativen Abwehr, zur Proteostase und zu stressantwortabhängigen Signalwegen bei, die mit dem Glutathionstoffwechsel und Entgiftungspfaden verknüpft sind. Veränderte GSTO1-Aktivität und genetische Variationen wurden mit Anfälligkeit und Krankheitsprogression bei Störungen in Verbindung gebracht, die mit oxidativem Stress und Entzündung assoziiert sind, darunter neurodegenerative und kardiometabolische Phänotypen sowie Aspekte der Tumorbiologie. Diese Eigenschaften machen GSTO1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um redoxregulierte Signalwege, mitochondriale und ER‑Stressantworten sowie den Einfluss glutathionabhängiger Chemie auf Entscheidungen über das Zellschicksal zu untersuchen.

GSTO1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GSTO1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GSTO1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GSTO1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GSTO1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GSTO1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GSTO1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GSTO1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GSTO1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GSTO1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.