GSTM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406828

Übersicht

GSTM5 kodiert die Glutathion-S-Transferase Mu 5 (GSTM5), ein Phase-II-Detoxifikationsenzym, das die Konjugation von reduziertem Glutathion an elektrophile Verbindungen katalysiert und so die zelluläre Abwehr gegen Xenobiotika und reaktive Sauerstoffspezies unterstützt. Als Teil des glutathionabhängigen Redoxnetzwerks trägt GSTM5 zur Aufrechterhaltung der Proteostase bei und begrenzt oxidative Schäden an Lipiden, Proteinen und DNA. Variationen oder eine Dysregulation der Aktivität der GSTM-Familie wurden mit einer veränderten Anfälligkeit für oxidativen Stress und entzündliche Signalwege in Verbindung gebracht – Prozesse, die häufig an Karzinogenese und Gewebeschädigung beteiligt sind. In menschlichen Zellen wird GSTM5 oft im Kontext des Chemikalienstoffwechsels, der Reaktionen auf Umweltexpositionen und von Mechanismen untersucht, die die zelluläre Redoxhomöostase prägen.

Das GSTM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GSTM5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GSTM5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GSTM5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GSTM5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GSTM5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GSTM5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GSTM5-Exone abzielen, die für die GSTM5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GSTM5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GSTM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GSTM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GSTM5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GSTM5 HDR-Plasmid (h) und GSTM5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GSTM5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GSTM5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.