GSS CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402992-ACT

Das humane **GSS** kodiert die Glutathion-Synthetase, ein ATP-abhängiges Enzym, das den letzten Schritt der Glutathion-(GSH)-Biosynthese katalysiert, indem es Glycin an γ‑Glutamylcystein ligiert. Durch die Kontrolle der intrazellulären GSH-Pools ist GSS zentral für die Redoxhomöostase, die Entgiftung elektrophiler Verbindungen über Glutathion‑S‑Transferase‑Signalwege sowie den Schutz vor oxidativen Schäden, die die mitochondriale Funktion und Signalwege des Zellüberlebens beeinflussen. Die GSS-Aktivität prägt zelluläre Antworten auf reaktive Sauerstoffspezies und unterstützt die metabolische Anpassung unter Stress, wodurch sie mit Prozessen wie der Anfälligkeit für Ferroptose, dem Xenobiotika‑Metabolismus und inflammatorischer Signalgebung verknüpft ist. Eine genetische oder funktionelle Beeinträchtigung von GSS ist mit Glutathionmangel und Phänotypen oxidativen Stresses assoziiert und liefert eine mechanistische Verbindung zu hämatologischen und neurologischen Funktionsstörungen sowie zu einer breiteren, redoxbezogenen Krankheitsbiologie.

GSS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GSS-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GSS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GSS-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GSS-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GSS-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GSS-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GSS-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GSS-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GSS-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.