GSK3 beta CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400090-ACT

Das humane Gen **GSK3B** kodiert die Glykogensynthase-Kinase 3 Beta (GSK3β), eine konstitutiv aktive Serin/Threonin-Kinase, die Nährstoff- und Wachstumsfaktorsignale integriert, um Zellschicksalsentscheidungen zu koordinieren. GSK3β ist ein zentraler negativer Regulator der kanonischen Wnt/β‑Catenin-Signalübertragung und ist außerdem an PI3K–AKT-, Insulin-/Glykogenstoffwechsel-, Hedgehog-, Notch- und NF‑κB-assoziierten Prozessen beteiligt, wodurch Transkription, Proliferation, Apoptose und Differenzierung beeinflusst werden. Durch die Phosphorylierung verschiedener Substrate wie β‑Catenin und mehrerer transkriptioneller Regulatoren wirkt GSK3β auf die Zytoskelettdynamik, die Zellzyklussteuerung und die metabolische Homöostase ein. Eine fehlregulierte GSK3B-Signalgebung wurde in unterschiedlichen Forschungskontexten beschrieben, darunter Krebsbiologie, neurodegenerationsassoziierte Signalwege, Entzündung sowie Modelle metabolischer Erkrankungen.

GSK3 beta Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GSK3B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GSK3 beta Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GSK3B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GSK3B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GSK3 beta-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GSK3B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GSK3 beta-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GSK3 beta-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GSK3B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.