GSDMDC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406596-ACT

GSDMD (Gasdermin D; auch als GSDMDC1 bezeichnet) kodiert einen porenbildenden Effektor des entzündlichen Zelltods, der durch proteolytische Spaltung nachgeschaltet zur Inflammasom-Signalgebung aktiviert wird. Nach der Spaltung durch Caspase‑1 oder über die Caspase‑4/5/11‑Signalwege oligomerisiert das N‑terminale Fragment in Membranen, löst Pyroptose aus und fördert die Freisetzung von Zytokinen der IL‑1‑Familie. Damit verknüpft es die angeborene Immunerkennung mit einem lytischen Zelltod. Diese Achse ist in NLRP3‑ und verwandte Inflammasom‑Signalwege eingebunden und prägt sowohl die antimikrobielle Abwehr als auch sterile Entzündung. Eine fehlregulierte GSDMD‑Aktivität wurde mit chronischen Entzündungszuständen, Modellen sepsisassoziierter Entzündung und Tumor‑Immun‑Interaktionen in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien zu Zelltod‑ und Zytokinbiologie in humanen Systemen motiviert.

GSDMDC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GSDMD-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GSDMDC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GSDMD-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GSDMD-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GSDMDC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GSDMD-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GSDMDC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GSDMDC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GSDMD-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.