GRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402811

Übersicht

Das Gastrin-releasing Peptide (GRP) ist ein Neuropeptid, das über die Bombesin-Rezeptorfamilie, vor allem über den GRPR, signalisiert und dadurch den intrazellulären Calciumfluss, die Aktivität der Phospholipase C sowie nachgeschaltete MAPK/ERK- und PI3K‑AKT-Signalwege reguliert. In menschlichen Geweben trägt GRP zur neuroendokrinen Kommunikation, zur Homöostase von Epithelien und zur Modulation sekretorischer und kontraktiler Antworten bei. Eine dysregulierte GRP–GRPR-Signalgebung wurde mit veränderter Proliferation, Migration und neuroinflammatorischen Reaktionen in Verbindung gebracht, wodurch GRP ein relevanter Knotenpunkt in Studien zu onkogener Signalgebung und zur Kommunikation zwischen Tumor und Mikroumgebung ist. Die Expression und Prozessierung von GRP überschneiden sich zudem mit der Reifung von Peptidhormonen und Wegen der regulierten Sekretion, was seine Nutzung als Marker für neuroendokrine Zustände und Signalplastizität unterstützt.

Das GRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GRP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GRP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GRP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GRP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GRP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GRP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GRP-Exone abzielen, die für die GRP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GRP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GRP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GRP HDR-Plasmid (h) und GRP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GRP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GRP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.