Plásmido CRISPR de Activación (h) GRP: sc-402811-ACT

El GRP humano (péptido liberador de gastrina) codifica un neuropéptido que señaliza a través de GRPR para regular la movilización intracelular de Ca²⁺ y la actividad posterior de las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT en múltiples contextos epiteliales y neuronales. La señalización autocrina y paracrina mediada por GRP puede influir en la secreción, la contractilidad del músculo liso, la proliferación celular y la comunicación neuroendocrina. En investigación en biología del cáncer y neurobiología, la actividad alterada del eje GRP/GRPR se ha asociado con una señalización de crecimiento desregulada y con cambios en la función de circuitos impulsada por neuropéptidos. Por ello, el GRP se estudia con frecuencia como un modulador de redes de señalización de GPCR que se interconectan con programas transcripcionales y estados de diferenciación celular.

GRP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GRP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GRP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GRP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GRP en células tumorales con expresión de GRP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.