GRP 75 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420983

概要

Hspa9はGRP75（mortalin）をコードしており、GRP75はミトコンドリアHSP70ファミリーに属するシャペロンとして、ミトコンドリアマトリックス内でのタンパク質の取り込み、フォールディング、およびプロテオスタシスの維持を支えます。GRP75はミトコンドリアの品質管理、酸化的リン酸化の制御、ならびにレドックス恒常性に影響する鉄–硫黄クラスターやヘム関連プロセスの維持にも関与します。さらに、カルシウム制御やストレスシグナル伝達を形作るシャペロンネットワークを介して、ミトコンドリアと小胞体（ER）のコミュニケーションにも寄与します。Hspa9/GRP75の制御異常は、ミトコンドリア機能障害や細胞ストレス表現型と関連しており、神経変性、心代謝機能障害、ならびに形質転換に伴う生体エネルギー経路のリモデリングに関係する可能性が示されています。

GRP 75 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHspa9遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hspa9内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hspa9のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRP 75タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRP 75シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hspa9欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRP 75の機能に不可欠なHspa9エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hspa9ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRP 75 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGRP 75 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hspa9遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRP 75 HDRプラスミド（m）および GRP 75 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHspa9ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHspa9標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。