Plásmido Doble Nickase (h) group VI iPLA₂: sc-402107-NIC

PLA2G6 codifica la iPLA2 del grupo VI, una fosfolipasa A2 independiente de calcio que hidroliza fosfolípidos de membrana para generar ácidos grasos libres y lisofosfolípidos, modulando la señalización lipídica y la remodelación de membranas. Esta enzima contribuye a la homeostasis de fosfolípidos, la integridad mitocondrial, el tráfico vesicular y la biología de mediadores inflamatorios a través de vías vinculadas al ácido araquidónico. La actividad de PLA2G6 se cruza con las respuestas al estrés oxidativo y la muerte celular programada, influyendo en la susceptibilidad celular a la peroxidación lipídica y a la disfunción de orgánulos. Las alteraciones genéticas en PLA2G6 se asocian con neurodegeneración con acumulación de hierro en el cerebro y fenotipos parkinsonianos relacionados de inicio temprano, lo que respalda su relevancia para la investigación sobre el mantenimiento neuronal y el metabolismo lipídico.

group VI iPLA2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLA2G6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLA2G6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLA2G6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLA2G6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.