group IIF sPLA₂ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410098-ACT

PLA2G2F kodiert die sekretorische Phospholipase A2 (sPLA2) der Gruppe IIF, ein extrazelluläres Enzym, das Membranphospholipide hydrolysiert und dadurch freie Fettsäuren sowie Lysophospholipide freisetzt und so lokale Pools von Lipidmediatoren formt. Über die Regulation der Verfügbarkeit von Arachidonsäure beeinflusst sPLA2 der Gruppe IIF die Eicosanoid-Biosynthese und nachgeschaltete inflammatorische Signalwege, einschließlich Prostaglandin- und Leukotrien-Netzwerken. Die Expression von PLA2G2F ist mit epithelialer und barriereassoziierter Biologie verknüpft, in der Lipid-Remodelling zur Differenzierung, zu Stressantworten und zu zytokingetriebenen Programmen beiträgt. Eine dysregulierte sPLA2-Aktivität und ein Ungleichgewicht von Lipidmediatoren wurden mit entzündlichen Hauterkrankungen und weiteren immunvermittelten Pathologien in Verbindung gebracht, was die Relevanz für mechanistische Studien zu Entzündung und Gewebehomöostase unterstreicht.

group IIF sPLA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLA2G2F-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

group IIF sPLA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLA2G2F-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLA2G2F-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen group IIF sPLA2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLA2G2F-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von group IIF sPLA2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des group IIF sPLA2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLA2G2F-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.