group IID sPLA₂ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422283

Descripción general

Pla2g2d codifica la fosfolipasa A2 secretada del grupo IID (sPLA2), una enzima extracelular que hidroliza los fosfolípidos de membrana para liberar ácidos grasos libres y lisofosfolípidos, configurando los reservorios de mediadores lipídicos que alimentan las vías de señalización de los eicosanoides y rutas relacionadas. En tejidos de ratón enriquecidos en actividad inmunitaria, la sPLA2 del grupo IID contribuye a regular el tono inflamatorio al modular la función de las células presentadoras de antígeno, los programas de citocinas y las redes lipídicas asociadas a la resolución. A través de sus efectos sobre la disponibilidad de ácido araquidónico y la biosíntesis posterior de prostaglandinas y leucotrienos, Pla2g2d conecta la remodelación de fosfolípidos con el diálogo entre la inmunidad innata y adaptativa. La expresión o actividad desregulada se ha asociado con una susceptibilidad alterada a patologías inflamatorias y a la remodelación tisular impulsada por el sistema inmunitario en modelos preclínicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO group IID sPLA2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pla2g2d en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pla2g2d junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pla2g2d tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína group IID sPLA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pla2g2d para la investigación de la señalización de group IID sPLA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pla2g2d críticos para la función de group IID sPLA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pla2g2d para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido group IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido group IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pla2g2d. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR group IID sPLA2 (m) y el plásmido HDR group IID sPLA2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pla2g2d para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pla2g2d definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.