GRK 5 Double Nickase Plasmid (h): sc-401285-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GRK 5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GRK 5 Double-Nickase-Plasmid (h) und GRK 5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GRK5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GRK 5: sc-518005
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GRK 5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401285-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRK 5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401285-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRK5 kodiert die G‑Protein‑gekoppelte Rezeptorkinase 5 (GRK5), eine Serin/Threonin‑Kinase, die aktivierte GPCRs phosphoryliert und dadurch die Rekrutierung von β‑Arrestin, die Desensibilisierung der Rezeptoren und deren Internalisierung fördert. Über diese Regulierung der Dynamik der GPCR‑Signalübertragung beeinflusst GRK5 Second‑Messenger‑Signalwege wie cAMP/PKA und PLC/PKC, prägt nachgeschaltete MAPK/ERK‑Signale sowie calciumabhängige Antworten. Über die Signalgebung an der Plasmamembran hinaus wurde GRK5 auch mit nukleären Funktionen in Verbindung gebracht, darunter die Modulation von Transkriptionsprogrammen, die zelluläre Stressantworten und Remodelling beeinflussen. Eine Fehlregulation der GRK5‑Aktivität oder ‑Expression wurde mit kardiovaskulären und neuroinflammatorischen Phänotypen assoziiert und wird in Kontexten untersucht, in denen eine aberrante GPCR‑Signalübertragung zu krankheitsrelevanten zellulären Zuständen beiträgt.
GRK 5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GRK5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GRK5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GRK5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GRK5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.