Plasmide CRISPR d'Activation (h) GRK 5: sc-401285-ACT

La GRK5 humaine (G protein-coupled receptor kinase 5) est une kinase sérine/thréonine qui phosphoryle les GPCR activés afin de réguler la désensibilisation des récepteurs, leur internalisation et l’amplitude de la signalisation en aval. Au-delà du contrôle canonique des GPCR, la GRK5 peut influencer des voies dépendantes de la β-arrestine et moduler des nœuds de signalisation liés aux processus régulés par le Ca2+, aux réponses inflammatoires et à l’adaptation cellulaire au stress. L’activité de la GRK5 façonne les interactions entre voies affectant les réseaux de signalisation cardiovasculaires et neurobiologiques, et une expression ou une régulation altérée de la GRK5 a été associée à des phénotypes pertinents pour la maladie, notamment le remodelage cardiaque et des dysfonctions neurologiques. Ces fonctions font de la GRK5 une cible utile pour analyser le biais de signalisation des récepteurs, la cinétique d’extinction du signal et des programmes transcriptionnels dépendants du contexte.

GRK 5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GRK5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GRK 5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GRK5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GRK5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GRK 5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GRK5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GRK 5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GRK 5 dans les cellules tumorales présentant une expression de GRK5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.