GRIP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421837

Übersicht

Ncoa2 kodiert GRIP-1 (Glucocorticoid-Rezeptor–interagierendes Protein 1), einen nukleären Rezeptor-Koaktivator, der die hormonabhängige Transkription koordiniert, indem er ligandenbesetzte Rezeptoren mit Chromatin-modifizierenden Komplexen und der basalen Transkriptionsmaschinerie verknüpft. In Mauszellen wirkt GRIP-1 innerhalb von Signalnetzwerken für Steroidhormone, darunter Signalwege des Glucocorticoid-, Estrogen-, Androgen-, Schilddrüsenhormon- und Retinsäure-Rezeptors, und beeinflusst Genprogramme, die Entwicklung, Stoffwechsel, Immunantworten und zelluläre Differenzierung regulieren. Als Mitglied der SRC/p160-Koaktivatorfamilie integriert GRIP-1 Signale über Interaktionen mit Histon-Acetyltransferasen und Mediator-assoziierten Faktoren, um die Aktivität von Enhancern und Promotoren zu modulieren. Eine fehlregulierte Koaktivierung nukleärer Rezeptoren und eine veränderte transkriptionelle Kontrolle unter Beteiligung von Proteinen der NCOA2-Familie wurden mit aberrantem Wachstum und veränderten Zelllinienprogrammen in Verbindung gebracht, wodurch Ncoa2 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien der Transkriptionsregulation in krankheitsrelevanten Modellen ist.

Das GRIP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ncoa2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ncoa2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ncoa2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GRIP-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ncoa2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GRIP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ncoa2-Exone abzielen, die für die GRIP-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ncoa2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GRIP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GRIP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ncoa2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GRIP-1 HDR-Plasmid (m) und GRIP-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ncoa2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ncoa2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.