Plasmide CRISPR d'Activation (h) GRIN1: sc-405452-ACT

GPRIN1 (inducteur 1 de la croissance des neurites régulé par les protéines G) code une protéine enrichie dans les neurones, impliquée dans l’extension des neurites, la dynamique du cône de croissance et la maturation synaptique, via la modulation de la signalisation couplée aux protéines G et le remodelage du cytosquelette. Les processus associés à GPRIN1 recoupent des programmes de différenciation neuronale et des voies dépendantes de l’activité qui façonnent la connectivité et la plasticité. Une expression dérégulée ou des perturbations de réseau impliquant GPRIN1 ont été étudiées dans le contexte de la biologie des maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques, où l’altération de la neuritogenèse et de la fonction synaptique constitue un thème récurrent. En tant qu’effecteur de la signalisation neuronale humaine, GPRIN1 représente une cible exploitable pour des études mécanistiques de phénotypes liés à la connectivité dans des modèles cellulaires pertinents.

GRIN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPRIN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GRIN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPRIN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPRIN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GRIN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPRIN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GRIN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GRIN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPRIN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.