Grim19 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403264-ACT

O NDUFA13 humano codifica a Grim19, uma subunidade acessória do complexo I da cadeia respiratória mitocondrial que auxilia a transferência de elétrons e a fosforilação oxidativa, ajudando a manter o potencial de membrana mitocondrial e a produção celular de ATP. Além da bioenergética, a Grim19 tem sido associada à homeostase redox e à sinalização de estresse mitocondrial, conectando a função mitocondrial a uma regulação mais ampla das redes de apoptose e de sinalização inflamatória. A alteração da expressão de NDUFA13 ou a disfunção do complexo I está associada a mecanismos de doenças mitocondriais e tem sido estudada em contextos de desregulação metabólica, neurodegeneração e biologia tumoral, nos quais respiração, ROS e vias de sobrevivência celular se intersectam.

Grim19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NDUFA13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Grim19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NDUFA13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NDUFA13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Grim19. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NDUFA13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Grim19 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Grim19 em células tumorais com expressão de NDUFA13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.