gremlin-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401244-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das gremlin-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- gremlin-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und gremlin-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GREM1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: gremlin-1: sc-515877
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
gremlin-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401244-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
gremlin-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401244-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GREM1 kodiert Gremlin‑1, ein sezerniertes Glykoprotein der DAN‑Familie, das Knochenmorphogeneseproteine antagonisiert, insbesondere BMP2, BMP4 und BMP7, und dadurch die Output‑Signale der TGF‑β/BMP‑Signalgebung mitprägt. Durch die Modulation der rezeptorvermittelten SMAD‑Phosphorylierung reguliert Gremlin‑1 den epithelial‑mesenchymalen Crosstalk, den Umbau der extrazellulären Matrix, angiogene Programme sowie die Festlegung von Zelllinien während der Entwicklung und der Gewebereparatur. Eine fehlregulierte GREM1‑Expression wurde mit fibrotischem Remodeling und veränderter stromaler Signalgebung in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von Tumor‑Mikroumgebungs‑Interaktionen und aberranten Morphogengradienten in der Krebsbiologie untersucht. Als diffusibler BMP‑Inhibitor stellt Gremlin‑1 einen gut zugänglichen Knotenpunkt dar, um parakrine Signalgebung und Pfadkompensation innerhalb von BMP/TGF‑β‑Netzwerken zu analysieren.
gremlin-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GREM1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GREM1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GREM1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GREM1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.