gremlin-1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423885-ACT

Das murine Gen **Grem1** kodiert **Gremlin-1**, einen sezernierten Antagonisten aus der DAN-Familie, der an **BMP2**, **BMP4** und **BMP7** bindet, um die Signalübertragung der **BMP/TGF-β-Superfamilie** sowie die nachgeschaltete **SMAD-abhängige** Transkription zu modulieren. Durch die Dämpfung der BMP-Aktivität beeinflusst Gremlin-1 die embryonale Musterbildung, epithel–mesenchymale Interaktionen und die Gewebehomöostase und kann das Remodeling der extrazellulären Matrix sowie den Austausch zwischen Stroma und Parenchym mitprägen. Eine fehlregulierte **Grem1**-Expression steht mit veränderten Entwicklungsprogrammen und fibroseassoziierten Prozessen in Zusammenhang und wird häufig in Kontexten untersucht, in denen BMP-Signale die Linienfestlegung und die Regulation des Mikromilieus steuern. In Mausmodellen stellt **Grem1** einen gut handhabbaren Ansatzpunkt dar, um die Dynamik des BMP-Signalwegs während der Organogenese und in krankheitsrelevanten Remodeling-Zuständen zu analysieren.

gremlin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Grem1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

gremlin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Grem1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Grem1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen gremlin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Grem1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von gremlin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des gremlin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Grem1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.