gremlin-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401244-ACT

GREM1 kodiert Gremlin-1, ein sezerniertes Glykoprotein, das als extrazellulärer Antagonist von bone morphogenetic proteins (BMP2, BMP4 und BMP7) wirkt und dadurch die Signalübertragung der BMP/TGF-β-Superfamilie in der Entwicklung sowie in der Gewebehomöostase adulter Organismen mitprägt. Durch die Modulation der Ligandenverfügbarkeit beeinflusst Gremlin-1 Zellschicksalsentscheidungen, epithelial–mesenchymale Interaktionen und Umbauprogramme wie Proliferation, Differenzierung und Fibrose. Eine fehlregulierte GREM1-Expression wurde in mehreren Krankheitskontexten – darunter fibrotische Erkrankungen und krebsassoziierte Signalwege – mit veränderter Stromа–Epithel-Kommunikation, aberranter Matrixablagerung und protumorigener Signalgebung im Mikromilieu in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen GREM1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Kontrolle des BMP-Signalwegs und zu extrazellulären Signalnetzwerken.

gremlin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GREM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

gremlin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GREM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GREM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen gremlin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GREM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von gremlin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des gremlin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GREM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.