Plásmido CRISPR de Activación (h) GRB2: sc-400482-ACT

GRB2 (proteína 2 unida al receptor de factor de crecimiento) es una proteína adaptadora expresada de manera ubicua que acopla las tirosina quinasas receptoras activadas a la señalización aguas abajo a través de sus dominios SH2 y SH3. Al enlazar receptores fosforilados y proteínas de anclaje con SOS y otros efectores, GRB2 promueve la activación de la cascada RAS–RAF–MEK–ERK y coordina la comunicación cruzada con PI3K/AKT y otras vías mitogénicas. La señalización dependiente de GRB2 influye en la proliferación, la diferenciación, la supervivencia, la remodelación del citoesqueleto y la endocitosis de receptores en muchos tipos celulares humanos. Las redes desreguladas centradas en GRB2 se investigan con frecuencia en la señalización oncogénica por factores de crecimiento, la actividad aberrante de la vía MAPK y otros fenotipos de enfermedad impulsados por la señalización, relevantes para el control del estado celular.

GRB2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GRB2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GRB2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GRB2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GRB2 en células tumorales con expresión de GRB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.