Plasmide Double Nickase (h) GRB10: sc-401904-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GRB10 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GRB10 Double Nickase (h) et le plasmide GRB10 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GRB10. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GRB10 Antibody (C-11): sc-74509
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GRB10 | sc-401904-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GRB10 | sc-401904-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRB10 (growth factor receptor bound protein 10) est une protéine adaptatrice qui se lie aux récepteurs à activité tyrosine kinase activés, notamment les récepteurs de l’insuline et de l’IGF‑1, afin de moduler l’intensité et la durée de la signalisation en aval. Grâce à ses domaines PH et SH2 et à ses régions riches en prolines, GRB10 s’interface avec les voies PI3K–AKT–mTOR et MAPK et influence le trafic des récepteurs, leur dégradation dépendante de l’ubiquitine et le contrôle par rétroaction de la signalisation des facteurs de croissance. Ces activités relient GRB10 à la régulation de la prolifération et de la survie cellulaires, ainsi qu’à l’homéostasie métabolique ; une expression ou une signalisation altérées de GRB10 sont impliquées dans la dérégulation de voies associées au cancer et dans des perturbations de l’axe insuline/IGF dans des modèles de maladies métaboliques. GRB10 est également étudiée dans des contextes de régulation du développement et de la croissance, ainsi que de phénotypes associés à l’empreinte génomique.
GRB10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRB10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRB10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRB10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRB10.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.