GRB10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401904-NIC

GRB10（growth factor receptor bound protein 10）は、インスリン受容体やIGF-1受容体を含む活性化受容体型チロシンキナーゼに結合し、下流シグナルの強度と持続時間を調節するアダプタータンパク質です。GRB10はPHドメイン、SH2ドメイン、プロリンリッチ領域を介してPI3K–AKT–mTOR経路およびMAPK経路と相互作用し、受容体のトラフィッキング、ユビキチン依存的な分解制御、ならびに成長因子シグナルのフィードバック制御に影響を及ぼします。これらの作用により、GRB10は細胞増殖・生存・代謝恒常性の制御と結び付いており、GRB10の発現やシグナル伝達の異常は、がん関連経路の制御破綻や、代謝疾患モデルにおけるインスリン／IGF軸の攪乱に関与することが示唆されています。またGRB10は、発生期の成長制御やゲノムインプリンティングに関連した表現型の文脈でも研究されています。

GRB10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GRB10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GRB10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GRB10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GRB10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。