granzyme B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401469-ACT

ヒトのGZMBは、グランザイムBをコードする。グランザイムBはトリプシン様のセリンプロテアーゼで、CD8+ T細胞およびNK細胞の細胞傷害性顆粒に蓄えられており、パーフォリン依存的に標的細胞内へ送達された後、標的細胞の殺傷を媒介する。グランザイムBは主要な基質を切断してカスパーゼ依存性アポトーシスを活性化し、さらにミトコンドリア機能の攪乱を介してカスパーゼ非依存性の細胞死経路にも関与し得るため、抗原認識や炎症性シグナル伝達の下流にある免疫エフェクタープログラムと結び付けられている。GZMBの発現や活性の破綻は、慢性炎症や自己免疫における免疫駆動性の組織傷害・リモデリング、ならびにがんやウイルス感染の状況における細胞傷害性サーベイランスの変化と関連することが報告されている。そのためGZMBは、細胞傷害性リンパ球の活性化を示す機能的マーカーとして広く用いられるとともに、アポトーシス、免疫シナプスの生物学、免疫病理の研究における機序的ハブとしても位置付けられている。

granzyme B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GZMBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

granzyme B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GZMB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGZMB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性granzyme Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGZMB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるgranzyme B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGZMB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるgranzyme B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。