Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPVI: sc-404055-ACT

GP6 code la glycoprotéine VI (GPVI), un récepteur de la superfamille des immunoglobulines spécifique des plaquettes, qui assure l’adhésion et l’activation en réponse au collagène et à des ligands apparentés exposés aux sites de lésion vasculaire. GPVI transmet ses signaux via la chaîne FcRγ et des voies dépendantes de l’ITAM, recrutant les kinases Src et Syk, ce qui déclenche l’activation de PLCγ2, la mobilisation du calcium intracellulaire, l’activation des intégrines, la sécrétion et le remodelage du cytosquelette. Ces processus coordonnent la formation du thrombus et les interactions entre les plaquettes et la paroi vasculaire, et s’articulent avec des réseaux de signalisation hémostatiques et inflammatoires plus larges. Une activité modifiée de l’axe GPVI est étudiée dans le contexte des troubles de la fonction plaquettaire, des mécanismes thrombo-inflammatoires et de la biologie des maladies vasculaires.

GPVI Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GP6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPVI Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GP6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GP6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPVI. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GP6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPVI au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPVI dans les cellules tumorales présentant une expression de GP6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.