Plásmido Doble Nickase (h) GPRC5B: sc-409271-NIC

GPRC5B (miembro B del grupo 5 de la familia C de receptores acoplados a proteína G) es una proteína tipo GPCR huérfana inducible por ácido retinoico, enriquecida en la membrana plasmática e implicada en la modulación de la señalización de receptores y de redes de adaptadores proximales a la membrana. Se ha relacionado con la regulación de la dinámica de señalización MAPK/ERK y PI3K/AKT, influyendo en el crecimiento celular, la diferenciación y programas transcripcionales sensibles al estrés. En tejidos humanos, la expresión de GPRC5B se correlaciona con fenotipos metabólicos e inflamatorios, y se ha descrito una regulación alterada en contextos que incluyen la señalización de insulina asociada a la obesidad, la neuroinflamación y la biología tumoral. Como nodo de señalización, GPRC5B se estudia con frecuencia por sus efectos sobre la intercomunicación entre vías, el tráfico de receptores y las salidas transcripcionales aguas abajo.

GPRC5B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPRC5B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPRC5B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPRC5B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPRC5B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.