Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPRC5B (r): sc-437288

Présentation

GPRC5B (récepteur couplé aux protéines G de classe C, groupe 5, membre B) est une protéine membranaire de type GPCR orpheline impliquée dans la régulation de la signalisation cellulaire et du trafic membranaire dans de nombreux tissus, notamment le cerveau, le tissu adipeux et des compartiments pertinents pour l’immunité. Elle a été associée à la modulation de l’activité des voies MAPK/ERK et PI3K–AKT, influençant des processus tels que la prolifération, la différenciation et la signalisation inflammatoire. En biologie métabolique, GPRC5B est liée à la signalisation de l’insuline et à la fonction des adipocytes, et une expression altérée a été rapportée dans des contextes d’obésité et de phénotypes cardiométaboliques associés. Ses profils d’expression et ses connexions de signalisation la rendent également pertinente pour l’étude de la neuroinflammation et des voies sensibles au stress dans des modèles cellulaires et physiologiques chez le rat.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPRC5B (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPRC5B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de GPRC5B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de GPRC5B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPRC5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le GPRC5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPRC5B plasmide HDR (r) et le GPRC5B (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.