GPRC5B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409271

Descripción general

GPRC5B (receptor acoplado a proteína G, clase C, grupo 5, miembro B) es una proteína de membrana similar a un GPCR huérfano implicada en la integración de señales en la superficie celular, con funciones descritas en la regulación de las salidas de las vías MAPK/ERK y PI3K-AKT, el tráfico de receptores y las respuestas transcripcionales a señales extracelulares. Se expresa en múltiples tejidos y se ha relacionado con el control de la proliferación celular, la diferenciación y la señalización metabólica, incluidos procesos sensibles a la insulina en contextos de tejido adiposo y músculo. La alteración de la expresión de GPRC5B se ha asociado con señalización inflamatoria y fenotipos oncogénicos en varios sistemas modelo, lo que sugiere relevancia para estudios de biología tumoral, mecanismos de enfermedad metabólica y vías relacionadas con el sistema inmunitario. Como regulador asociado a membrana, se investiga con frecuencia por su impacto en la comunicación cruzada entre receptores, la dinámica de la señalización celular y programas adaptativos al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPRC5B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GPRC5B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GPRC5B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GPRC5B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPRC5B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GPRC5B para la investigación de la señalización de GPRC5B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GPRC5B críticos para la función de GPRC5B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GPRC5B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPRC5B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPRC5B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GPRC5B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPRC5B (h) y el plásmido HDR GPRC5B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GPRC5B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GPRC5B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.