GPR88 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403566-ACT

GPR88 kodiert einen verwaisten G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor (GPCR), der in striatalen mittelgroßen stacheligen Neuronen (medium spiny neurons) stark angereichert ist und zur Feinabstimmung der neuronalen Erregbarkeit und der synaptischen Übertragung beiträgt. Über die Kopplung an heterotrimere G‑Proteine ist GPR88 mit der Modulation cAMP‑abhängiger Signalwege, nachgeschalteter Kinasekaskaden sowie aktivitätsabhängiger Transkriptionsprogramme verknüpft, die die Funktion kortikostriataler Schaltkreise prägen. Eine veränderte Expression oder Signalübertragung von GPR88 wurde mit neuropsychiatrischen und neurodevelopmentalen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Veränderungen der motorischen Kontrolle, belohnungsbezogener Verhaltensweisen und kognitiver Prozesse. Diese Eigenschaften machen GPR88 zu einem nützlichen Ziel, um GPCR‑regulierte Signalwege in menschlichen neuronalen Modellen zu untersuchen und Gen-Netzwerkantworten in Zellen striataler Abstammung zu analysieren.

GPR88 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GPR88-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPR88 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GPR88-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GPR88-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPR88-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GPR88-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPR88-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPR88-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GPR88-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.