GPR56 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406370-ACT

ADGRG1は、接着型Gタンパク質共役受容体であるGPR56（GPCR56）をコードしている。GPR56は大きな細胞外ドメインをもつ細胞表面受容体で、細胞—細胞間および細胞—細胞外マトリックス（ECM）間の相互作用を媒介し、細胞移動、極性、組織構築を制御する。GPR56は、三量体Gタンパク質および下流経路を介した接着依存的シグナル伝達に関与し、細胞骨格ダイナミクスやECMリモデリングに影響を与えることが知られており、複数の細胞文脈においてRhoA関連シグナルへの共役が報告されている。神経系では皮質発生やニューロンの位置決めに寄与し、ADGRG1発現の異常は神経発達表現型や、がんモデルにおける浸潤挙動の変化と関連づけられている。これらの性質により、ADGRG1は接着型GPCRの生物学、ECM連関シグナル伝達、ならびに細胞表面受容体の制御が転写プログラムや遊走プログラムに結び付く機構を研究するうえで有用な結節点となる。

GPR56 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADGRG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR56 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADGRG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADGRG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR56の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADGRG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR56依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADGRG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR56経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。