GPR55 Double Nickase Plasmid (m): sc-432690-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR55 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR55 Double-Nickase-Plasmid (m) und GPR55 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Gpr55 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR55 Double Nickase Plasmid (m) | sc-432690-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR55 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432690-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Gpr55* kodiert GPR55, einen verwaisten GPCR der Klasse A, der auf bioaktive Lipide anspricht und an mehrere nachgeschaltete Effektoren koppelt, darunter RhoA/ROCK, ERK/MAPK und PLC-vermittelte Ca²⁺-Signalübertragung. Die Aktivität von GPR55 beeinflusst die Umgestaltung des Zytoskeletts, Zellmigration und Proliferation und kann entzündliche Signalwege über Crosstalk mit endocannabinoidbezogenen Signalwegen modulieren. Im Immunsystem und im Nervengewebe wird GPR55 damit in Verbindung gebracht, Zytokinantworten, Neuroinflammation und die neuronale Erregbarkeit mitzuprägen. Eine fehlregulierte GPR55-Signalgebung wurde in experimentellen Modellen mit entzündlichen Erkrankungen, schmerzbezogenen Phänotypen, Veränderungen des Knochenumbaus und einer veränderten metabolischen Homöostase assoziiert, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zu GPCR-getriebenen Signalnetzwerken unterstützt.
GPR55 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Gpr55-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Gpr55 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Gpr55-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Gpr55-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.