GPR55 Double Nickase Plasmid (h): sc-411265-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR55 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR55 Double-Nickase-Plasmid (h) und GPR55 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPR55 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR55 Double Nickase Plasmid (h) | sc-411265-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR55 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-411265-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR55 kodiert einen atypischen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der auf lipidabgeleitete Liganden reagiert und an mehrere G‑Protein‑Signalwege koppelt, um die intrazelluläre Ca²⁺‑Signalgebung, RhoA/ROCK‑abhängiges zytoskeletales Remodeling sowie die MAPK/ERK‑Aktivierung zu regulieren. In menschlichen Zellen beeinflusst die GPR55‑Signalübertragung Zellmigration, Proliferation und Entzündungsreaktionen; beschrieben sind zudem Funktionen in Immunzellen und eine Wechselwirkung mit endocannabinoid‑verwandten Netzwerken. Eine veränderte GPR55‑Expression oder ‑Signalgebung wurde in Studien mit Krebszell‑Invasivität, neuropathischer Schmerzsignalgebung, Stoffwechselregulation und Knochenhomöostase in Verbindung gebracht, was GPR55 zu einem nützlichen Ziel für die Aufklärung lipidvermittelter GPCR‑Biologie macht. Diese Eigenschaften unterstützen seinen Einsatz als Signalweg‑Knotenpunkt für mechanistische Forschung in der GPCR‑Pharmakologie sowie zu nachgeschalteten transkriptionellen und phänotypischen Programmen.
GPR55 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPR55-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPR55 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPR55-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPR55-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.