Plasmide Double Nickase (h) GPR40: sc-401434-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR40 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR40 Double Nickase (h) et le plasmide GPR40 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FFAR1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR40 | sc-401434-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR40 | sc-401434-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FFAR1 code pour GPR40, un RCPG (GPCR) de classe A sensible aux lipides, hautement réactif aux acides gras libres à chaîne moyenne et longue. Lors de son activation, GPR40 se couple principalement à Gαq/11 pour stimuler la signalisation de la phospholipase C, augmenter le Ca2+ intracellulaire et activer des voies dépendantes de la PKC qui modulent le couplage stimulus–sécrétion ainsi que des réseaux plus larges de signalisation métabolique. Dans les tissus humains, l’activité de FFAR1 est étroitement liée à la régulation, induite par les nutriments, de l’homéostasie endocrine et métabolique, avec des liens de recherche portant sur la fonction des cellules β, la dynamique de sécrétion de l’insuline et l’adaptation de la signalisation induite par les lipides. Un dérèglement de la détection des acides gras et de la signalisation en aval dépendante du Ca2+ a été étudié dans le cadre des mécanismes des maladies métaboliques, notamment le diabète de type 2 et l’insulinorésistance associée à l’obésité, ainsi que le remodelage métabolique lié à l’inflammation.
GPR40 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FFAR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FFAR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FFAR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FFAR1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.