Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR4 (h): sc-403659

Présentation

GPR4 code un récepteur couplé aux protéines G sensible aux protons, qui agit comme capteur du pH cellulaire en traduisant l’acidose extracellulaire en signalisation intracellulaire. Lorsqu’il est activé, GPR4 se couple à des protéines G hétérotrimériques pour moduler les voies dépendantes de l’AMPc/PKA et de la phospholipase C, influençant les flux de calcium, la dynamique du cytosquelette et des programmes transcriptionnels liés au comportement des cellules endothéliales et immunitaires. Son expression est enrichie dans des contextes vasculaires et inflammatoires, où les microenvironnements acides sont fréquents, et il a été étudié en lien avec l’activation endothéliale, le recrutement des leucocytes et les réponses tissulaires à l’hypoxie et à l’inflammation. Une signalisation GPR4 altérée a été associée à une dérégulation de la signalisation inflammatoire et des réponses au stress du microenvironnement, pertinentes pour la biologie des maladies cardiovasculaires et des pathologies à médiation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPR4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPR4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPR4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPR4 pour l'étude de la signalisation de GPR4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPR4 essentiels à la fonction de GPR4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPR4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPR4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR4 plasmide HDR (h) et le GPR4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPR4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPR4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.