GPR35 Lentiviral Activation Particles (m): sc-425672-LAC

Das murine Gen **Gpr35** kodiert **GPR35**, einen rhodopsinähnlichen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der an der Erkennung niedermolekularer Liganden beteiligt ist und intrazelluläre Signalausgänge mitprägt, die den Calciumfluss, die cAMP‑Dynamik und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme beeinflussen. Die Aktivität von GPR35 wurde mit der Regulation der Chemotaxis und Aktivierung von Immunzellen, mit Reaktionen der epithelialen Barriere sowie mit breiteren entzündlichen Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, einschließlich Signalwegen, die in MAPK‑ und NF‑κB‑abhängige Genexpression hineinreichen. Expressionsdaten und genetische Assoziationen für GPR35 wurden in Geweben beschrieben, die für die mukosale Immunität und die metabolische Homöostase relevant sind, was Untersuchungen in Modellen der intestinalen Entzündung, der Schmerzsignalgebung und kardiometabolischer Phänotypen motiviert. Als konservierter GPCR mit kontextabhängiger Kopplung stellt GPR35 einen gut untersuchbaren Knotenpunkt dar, um rezeptorgetriebene genregulatorische Programme in Primärzellen und krankheitsrelevanten Mausmodellen zu analysieren.

GPR35 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Gpr35-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GPR35 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Gpr35-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GPR35-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Gpr35-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.