Particules Lentivirales d'Activation (m) GPR35: sc-425672-LAC

Le gène murin **Gpr35** code **GPR35**, un récepteur couplé aux protéines G de type rhodopsine impliqué dans la détection de ligands de petite taille et dans la modulation des sorties de signalisation intracellulaire qui influencent les flux calciques, la dynamique de l’AMPc et les programmes transcriptionnels en aval. L’activité de GPR35 a été associée à la régulation de la chimiotaxie et de l’activation des cellules immunitaires, aux réponses de la barrière épithéliale et, plus largement, à des réseaux de signalisation inflammatoire, y compris des voies qui croisent l’expression génique dépendante des MAPK et de NF-κB. L’expression de GPR35 et des associations génétiques impliquant ce gène ont été rapportées dans des tissus pertinents pour l’immunité muqueuse et l’homéostasie métabolique, ce qui motive son étude dans des modèles d’inflammation intestinale, de signalisation de la douleur et de phénotypes cardiométaboliques. En tant que GPCR conservé dont le couplage dépend du contexte, GPR35 constitue un nœud aisément exploitable pour disséquer des programmes de régulation génique pilotés par des récepteurs dans des cellules primaires et des systèmes murins pertinents pour la maladie.

Les particules d'activation lentivirales GPR35 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Gpr35 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPR35 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Gpr35, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPR35. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Gpr35 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.