GPR30 Double Nickase Plasmid (h): sc-402502-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR30 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR30 Double-Nickase-Plasmid (h) und GPR30 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPER1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR30 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402502-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR30 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402502-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes **GPER1** kodiert **GPR30 (GPER)**, einen membranassoziierten, G‑Protein‑gekoppelten Östrogenrezeptor, der schnelle, nicht-genomische Östrogensignale vermittelt. Nach Aktivierung moduliert GPR30 Second‑Messenger‑Signalwege wie **cAMP/PKA**, die Mobilisierung von intrazellulärem Calcium sowie die **MAPK/ERK**- und **PI3K/AKT**-Kaskaden und beeinflusst damit Zellproliferation, Überleben, Migration und Entzündungsreaktionen. Die **GPER1**-Aktivität überschneidet sich mit der **EGFR**-Transaktivierung und breiteren Signalnetzwerken von Steroidhormonen und formt über nachgeschaltete Kinasesignale Transkriptionsprogramme. Eine fehlregulierte **GPER1/GPR30**-Signalgebung wurde mit hormonabhängigen Krebserkrankungen, kardiovaskulären und metabolischen Phänotypen sowie immunbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht und stellt damit ein relevantes Ziel für mechanistische Studien zu Zellsignalen und Krankheitsmodellen dar.
GPR30 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPER1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPER1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPER1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPER1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.