GPR22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-428483

Übersicht

Gpr22 kodiert GPR22, einen verwaisten G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor (Orphan‑GPCR), der vor allem in der Herz‑ und Gefäßbiologie untersucht wird und mit der Regulation stressantwortender Signalwege sowie zellulärer Remodeling‑Programme in Verbindung steht. Obwohl sein endogener Ligand weiterhin unklar ist, legt eine GPCR‑typische Kopplung nahe, dass GPR22 Signalwege über Second Messenger wie cAMP/PKA und MAPK beeinflussen kann, die Transkriptionsantworten, Stoffwechsel und kontraktile Funktion mitprägen. In Mausmodellen und Expressionsstudien wurde GPR22 mit kardiovaskulären Phänotypen wie kardialer Hypertrophie und herzinsuffizienzassoziiertem Remodeling in Verbindung gebracht, was die Untersuchung seiner Rolle für die Homöostase von Kardiomyozyten und Gefäßzellen motiviert. Gpr22 wird zudem als Marker in gewebespezifischen transkriptomischen Profilen verwendet, um GPCR‑Signalzustände mit krankheitsrelevanten Gennetzwerken zu verknüpfen.

Das GPR22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gpr22-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gpr22-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gpr22 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR22-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gpr22-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR22-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gpr22-Exone abzielen, die für die GPR22-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gpr22-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GPR22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gpr22-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR22 HDR-Plasmid (m) und GPR22 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gpr22-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gpr22-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.