GPR19 Double Nickase Plasmid (h): sc-407000-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR19 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR19 Double-Nickase-Plasmid (h) und GPR19 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPR19 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR19 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407000-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR19 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407000-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR19 kodiert einen verwaisten G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor (GPCR) der Klasse A, der überwiegend an intrazellulären Membranen lokalisiert ist und mit der Regulation der zyklischen Nukleotid‑Signalgebung, von Zellüberlebensprogrammen sowie der neuronalen/endokrinen Homöostase in Verbindung gebracht wurde. Berichtete funktionelle Studien verknüpfen GPR19 mit der Modulation von MAPK/ERK‑ und cAMP‑abhängigen Signalwegen, was auf Rollen bei der Reiz‑Antwort‑Kopplung und der transkriptionellen Kontrolle downstream der GPCR‑Signalübertragung hindeutet. Expressionsmuster sowie genetische/omics‑basierte Assoziationen bringen GPR19 mit neurobehavioralen Phänotypen und neurodegenerativen Prozessen in Zusammenhang, einschließlich in Parkinson‑Erkrankung‑bezogenen Datensätzen beschriebener Korrelationen. Als membranständiger Signal‑Knoten mit unvollständig definierten Liganden und nachgeschalteten Effektoren ist GPR19 interessant, um die Verschaltung von GPCR‑Signalwegen und kontextabhängige Signalgebung in humanen Zellmodellen zu untersuchen.
GPR19 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPR19-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPR19 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPR19-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPR19-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.