GPR174 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413678-ACT

GPR174 (auch bekannt als Lysophosphatidylserin-Rezeptor) ist ein G‑Protein-gekoppelter Rezeptor, der in Immunzellen angereichert vorkommt und an der Regulation der Lymphozytenaktivierung, der Zytokinproduktion und der Immunhomöostase beteiligt ist. Nach Ligandenbindung kann er an eine Gαs-abhängige Signalübertragung koppeln, wodurch die cAMP-Produktion und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme beeinflusst werden, die funktionelle Zustände von T‑ und B‑Zellen prägen. Die Aktivität von GPR174 greift in breitere, durch GPCRs gesteuerte Signalwege ein, die Migration, Aktivierungsschwellen und entzündliche Signalkaskaden regulieren. Eine fehlregulierte Expression oder Signalgebung von GPR174 wurde mit der Biologie immunvermittelter Erkrankungen in Verbindung gebracht und bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt, um Immunregulation in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

GPR174 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GPR174-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPR174 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GPR174-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GPR174-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPR174-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GPR174-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPR174-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPR174-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GPR174-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.