Plásmido Doble Nickase (h) GPR17: sc-402977-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GPR17 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GPR17 (h) y el plásmido de doble nickasa GPR17 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GPR17. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GPR17 Anticuerpo (A-10): sc-514723
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GPR17 | sc-402977-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GPR17 | sc-402977-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR17 codifica un receptor acoplado a proteína G de tipo rodopsina que integra señales extracelulares purinérgicas y relacionadas con los leucotrienos cisteinílicos para modular vías intracelulares de segundos mensajeros, incluidas la señalización dependiente de AMPc y de calcio. En el sistema nervioso central, la expresión de GPR17 está enriquecida en células del linaje de los oligodendrocitos y se ha implicado en la coordinación del momento de activación de los programas de diferenciación y mielinización, vinculando la actividad del receptor con señales neuroinflamatorias y de remodelación tisular. El receptor también se ha estudiado en el contexto de respuestas al estrés isquémico y de señalización inflamatoria, donde la alteración de la señalización de GPCR puede reconfigurar los estados de activación glial y las redes transcripcionales posteriores. Como resultado, GPR17 es una diana útil para analizar la regulación mediada por GPCR del desarrollo neural, la señalización asociada a la inflamación y las transiciones de destino celular.
GPR17 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPR17 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPR17. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPR17. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPR17 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.