GPR14 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402393-ACT

UTS2R (GPR14) kodiert den menschlichen Urotensin‑II‑Rezeptor, einen GPCR der Klasse A, der Urotensin II und verwandte Peptide bindet und so den Vasomotorentonus sowie die zelluläre Kontraktilität reguliert. Die Aktivierung des Rezeptors rekrutiert heterotrimere G‑Proteine und führt zur Aktivierung der Phospholipase‑C‑Signalgebung, zur Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+ sowie zu nachgeschalteten MAPK/ERK‑ und RhoA/ROCK‑Signalwegen, die die Funktion glatter Muskulatur und proliferative Antworten beeinflussen. Expression und Signalgebung von UTS2R wurden in der kardiovaskulären und renalen Biologie untersucht, unter anderem in Zusammenhängen mit vaskulärem Remodeling, hypertonieassoziierten Signalwegen und kardiometabolischen Stressantworten. Darüber hinaus wurde die Aktivität von GPR14 in neuroendokrinen und entzündlichen Signalnetzwerken untersucht, in denen GPCR‑vermittelte Transkriptionsprogramme Veränderungen des Zellzustands steuern.

GPR14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UTS2R-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GPR14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UTS2R-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UTS2R-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GPR14-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UTS2R-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GPR14-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GPR14-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UTS2R-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.