GPR116 Lentiviral Activation Particles (h): sc-408424-LAC

ADGRF5 kodiert den Adhäsions‑G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor GPR116, einen Membranrezeptor, der an Signalprogrammen der Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Kommunikation beteiligt ist und so die Homöostase von Epithel- und Endothelgewebe mitprägt. Als aGPCR kann GPR116 an heterotrimere G‑Proteine koppeln und dadurch Second‑Messenger‑Signalwege sowie die Zytoskelettdynamik beeinflussen; beschrieben wurden Funktionen bei der Regulation von Barriereeigenschaften, des Entzündungsniveaus und des Gewebeumbaus. In der Lunge wurde GPR116 mit der Regulation des Surfactants und der alveolären Stabilität in Verbindung gebracht, wodurch die Rezeptoraktivität an Signalwege gekoppelt ist, die den Lipidstoffwechsel und die Epithelfunktion steuern. Eine veränderte Expression von ADGRF5/GPR116 wurde in Kontexten beobachtet, die für Entzündung und Krebsbiologie relevant sind, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt zur Untersuchung GPCR‑getriebener Phänotypen in humanen Zellen unterstützt.

GPR116 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ADGRF5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GPR116 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ADGRF5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GPR116-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ADGRF5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.