GPR105 Double Nickase Plasmid (m): sc-431244-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR105 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR105 Double-Nickase-Plasmid (m) und GPR105 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf P2ry14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR105 Double Nickase Plasmid (m) | sc-431244-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR105 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-431244-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse **P2ry14** kodiert den G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor **GPR105 (P2Y14)**, einen Nukleotidzuckerrezeptor, der durch UDP‑Zucker wie UDP‑Glukose aktiviert wird und primär an **Gi‑Signalwege** koppelt. Die Aktivierung von GPR105 kann die **cAMP‑Spiegel** modulieren und nachgeschaltete Signalwege beeinflussen, die Chemotaxis, Zytokinproduktion und die Aktivierung der angeborenen Immunantwort prägen; beschrieben sind zudem Funktionen in myeloiden Zellen und bei entzündlichen Prozessen an Barrieren. In murinen Systemen wurde die Aktivität von P2ry14 mit Entzündungsantworten und Signalwegen bei metabolischem Stress in Verbindung gebracht, was sie für Studien zu Atemwegs‑ und Darmentzündungen, zur Immunometabolik des Fettgewebes sowie zu mikrogliaassoziierten neuroinflammatorischen Prozessen relevant macht. Als GPCR an der Schnittstelle zwischen extrazellulärem Nukleotidstoffwechsel und Immun-Signalübertragung wird P2ry14 häufig genutzt, um die purinerge Regulation von Gewebehomöostase und krankheitsrelevanten Entzündungskreisläufen zu untersuchen.
GPR105 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des P2ry14-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von P2ry14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die P2ry14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit P2ry14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.