GPR105 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405954

Übersicht

P2RY14 kodiert GPR105, einen auf UDP-Zucker reagierenden, G‑Protein-gekoppelten Rezeptor, der extrazelluläre Nukleotidzucker wie UDP-Glukose und verwandte Liganden erkennt. Die GPR105-Signalübertragung koppelt vorwiegend an Gi-Signalwege und moduliert dadurch die cAMP-Dynamik, die Chemotaxis und inflammatorische Genprogramme, wodurch Gewebestress und die Freisetzung von Metaboliten mit dem Verhalten von Immunzellen verknüpft werden. Die Expression ist in Leukozytenpopulationen angereichert und wurde mit der Regulation angeborener und adaptiver Immunantworten in Verbindung gebracht, einschließlich der Funktionen von Makrophagen und dendritischen Zellen. Eine fehlregulierte P2RY14/GPR105-Aktivität wurde in inflammatorischen Mikroumgebungen und immunbezogenen Mechanismen beschrieben, die in kardiometabolischen und pulmonalen Krankheitskontexten relevant sind.

Das GPR105 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des P2RY14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des P2RY14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von P2RY14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR105-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von P2RY14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR105-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf P2RY14-Exone abzielen, die für die GPR105-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere P2RY14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR105 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPR105 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des P2RY14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR105 HDR-Plasmid (h) und GPR105 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von P2RY14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten P2RY14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.